Mutações sítio-dirigidas na metacaspase de S. cerevisiae: Uma abordagem, metodológica avançada para estudos estruturais e funcionais

Autores

  • Mariana Nascimento Romero Trujilho Universidade de Mogi das Cruzes
  • Laura de Azevedo Maffeis Dalzoto Universidade de Mogi das Cruzes
  • Taiz dos Reis Santos Universidade de Mogi das Cruzes
  • Laura Helena Araújo Universidade de Mogi das Cruzes
  • João Pedro Martins Silva Costa Universidade de Mogi das Cruzes
  • Ane Caroline Moreira Duarte Universidade de Mogi das Cruzes
  • Tatiane Faustino de Moraes Universidade de Mogi das Cruzes
  • Wagner Alves de Souza Judice Universidade de Mogi das Cruzes
  • Marcelo Ferreira Marcondes Machado Universidade Federal de São Paulo
  • Maurício Ferreira Marcondes Machado Universidade de Mogi das Cruzes

Palavras-chave:

Metacaspase, Saccharomyces cerevisiae, Mutação, Cisteína

Resumo

Objetivo: As metacaspases são cisteína-proteases que requerem cálcio para atividade e se ativam por autoprocessamento, diferentemente das caspases. As metacaspases são categorizadas em tipos I, II e III, como a ScMCA-IA em Saccharomyces cerevisiae, associada à apoptose. O estudo buscou clonar um ScMCA-IA recombinante, com mutações específicas nos resíduos Cys155 e Cys276, expressando e purificando essas proteínas. Os mutantes foram obtidos com sucesso usando sobreposição de fragmentos e método TEDA de clonagem, expressos em E. coli e purificados por cromatografia de camada e exclusão molecular. A identificação da importância da cisteína Cys155 no autoprocessamento da ScMCA-IA e a sugestão de um segundo processamento intermolecular entre metacaspases ativas, semelhante à ativação das caspases, foram resultados notáveis. Mostrou-se que os processamentos levam à forma ativa da enzima no C-terminal, diferente do descrito anteriormente. Concluindo, a presença de uma segunda cisteína catalítica na ScMCA-IA foi evidenciada, trazendo uma nova perspectiva sobre sua ativação, com processamentos antes não descritos, tanto autoprocessamento quanto intermolecular. 

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Publicado

05-12-2023

Como Citar

Trujilho, M. N. R., Dalzoto, L. de A. M., Santos, T. dos R., Araújo, L. H., Costa, J. P. M. S., Duarte, A. C. M., … Machado, M. F. M. (2023). Mutações sítio-dirigidas na metacaspase de S. cerevisiae: Uma abordagem, metodológica avançada para estudos estruturais e funcionais . Revista Científica UMC, 8(3), e080300028. Recuperado de https://seer.umc.br/index.php/revistaumc/article/view/1963

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